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酶联免疫吸附试验

酶联免疫吸附试验

简要描述:酶联免疫吸附试验,用于做ELISA检测的样本应首先离心除去沉淀物或悬浮物质保证样本澄清透明。为确保实验的准确性和可靠性,保证样品不被降解,建议-20℃或-80℃保存的样本在1-6个月内完成检测,4℃保存的样本在一周内完成检测。

更新时间:2022-10-25

厂商性质:生产厂家

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详细说明:

一、酶联免疫吸附试验液体样本:  

1.血清:PP管(不含热原和内毒素)收集全血,室温自然凝固20-30分钟,或4℃过夜,分离出血清,(适当倾斜离心管以扩大液面的横截面,使血清能更大程度分离出来)。4℃2000转/分离心20-30分钟,将血清和红细胞迅速小心地分离,收集上清,立即进行测定。如暂不检测可将收集的血清分装保存于-20℃或-80℃,避免反复冻融,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。血清样本应注意避免溶血和细菌污染。  

2.血浆:使用抗凝管或加入抗凝剂(EDTA、柠檬酸钠或肝素)的PP管收集全血,混合10-20分钟,4℃2000转/分,离心20-30分钟,收集上清,立即进行测定,如暂不检测可将收集的血清分装保存于-20℃或-80℃,避免反复冻融。样本应避免溶血或高血脂。保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。  

3.尿液、胸腹水、脑脊液、母乳、唾液:用无菌管收集样本,4℃2000转/分,离心20-30分钟。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。  

4.细胞培养上清:  

1)胞外:无菌管收集,4℃2000转/分,离心20-30分钟,除去细胞碎片和杂质,收集上清液备用,样本保存在-20℃或-80℃,避免反复冻融,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。  

2)胞内:加入裂解液,或用pH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液,使细胞浓度达到100万/ml左右,通过反复冻融(如果反复冻融,破碎效果不好,可采用超声波破碎),使细胞膜破坏并释放出细胞内成分,2000转/分,离心20-30分钟,收集上清。  


二、酶联免疫吸附试验固体样本:  

1.组织标本:标本采集后用液氮迅速冷冻保存备用。使用时切割标本,称取1g左右组织,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。4℃2000转/分,离心20分钟,仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。  

2.植物标本:取0.1g新鲜植物组织样本,液氮中充分研磨;加入样品体积9倍的提取液(pH7.2-7.4左右的PBS),4℃8000转/分离心30分钟,取上清并暂时保存于4℃待用。如需精确提取,可在液氮研磨后加入1ml的提取液(80%甲醇),-20℃过夜后再4℃8000转/分,离心1小时,取上清;上清液过C-18固相萃取柱,过柱后的样本真空干燥或氮气吹干,保存备用;上样前加入pH7.2-7.4左右的PBS缓冲液(1ml定容)。混匀后室温放置30分钟,4℃8000转/分,离心15分钟,取上清并暂时保存于4℃待用。  

3.土壤:称取1g土壤,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,充分混匀。4℃2000转/分,离心20分钟,仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。



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