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HCT116/L-OHP人结肠癌耐细胞(含STR鉴定)

HCT116/L-OHP人结肠癌耐细胞(含STR鉴定)

简要描述:HCT116/L-OHP人结肠癌耐细胞(含STR鉴定)
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更新时间:2022-07-19

厂商性质:生产厂家

访问次数:719

详细说明:

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细胞名称 HCT116/L-OHP人结肠癌耐细胞(含STR鉴定)

 二、传代细胞培养

 

(一)原理 体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代,以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞,并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后,由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭,将培养的细胞分散,从容器中取出,以1:2或l:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养,即为传代培养。 细胞“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间,与细胞世代或倍增不同。在一代中,细胞培增3~6次。细胞传代后,一般经过三个阶段:游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度,即细胞群的分裂相数/100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2%~0.5%,肿瘤细胞可达3~5%。细胞接种2~3天分裂增殖旺盛,是活力*时期,称指数增生期(对数生长期),适宜进行各种试验。  

 

(二)操作 1.将长成单层的原代培养细胞或HeLa细胞从二氧化碳培养箱中取出,在超净工作台中倒掉瓶内的培养液,加入少许消化液。(以液面盖住细胞为宜),静置5~10分钟。2.在倒置镜下观察被消化的细胞,如果细胞变园,相互之间不再连接成片,这时应立即在超净台中将消化液倒掉,加入3~5ml新鲜培养液,吹打,制成细胞悬液。 3.将细胞悬液吸出2ml左右,加到另一个培养瓶中并向每个瓶中分别加3ml左右培养液,盖好瓶塞,送回二氧化碳培养箱中,继续进行培养。  

 

(三)结果 一般情况,传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上,2~4天就可在瓶内形成单层,需要再次进行传代。 

 

【器材及液体的准备和无菌操作的注意事项 】 

 

(一)器材和液体的准备 细胞培养用的玻璃器材,如:培养瓶、吸管等在清洗干净以后,装在铝盒和铁筒中,120℃,2小时干烤灭菌后备用;手术器材、瓶塞、配制好的PBS液用灭菌锅15磅,20分钟蒸气灭菌;MEM培养液、小牛血清、消化液用G6滤器负压抽滤后备用。 

 

  • 无菌操作中的注意事项 在无菌操作中,一定要保持工作区的无菌清洁。为此,在操作前要认真地洗手并用75%乙醇消毒。操作前20~30分钟起动超净台吹风。操作时,严禁说话,严禁用手直接拿无菌的物品,如瓶塞等,而要用器械,如止血钳、镊子等去拿。培养瓶要在超净台内才能打开瓶塞,打开之前用乙醇将瓶口消毒,打开后和加塞前瓶口都要在酒精灯上烧一下,打开瓶口后的操作全部都要在超净台内完成。操作完毕后,加上瓶塞,才能拿到超净台外。使用的吸管在从消毒的铁筒中取出后要手拿末端,将*在火上烧一下然后再去吸取液体。总之,在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周围进行。

 HCT116/L-OHP人结肠癌耐细胞(含STR鉴定)

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选择上海青旗生物细胞有3个理由:

1、细胞状态好,形态佳,易成活,是市面上比较好养的细胞之一;

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3、使用我司推荐的进口品牌血清进行培养实验,效果更佳。

 

 

专业技术人员李工收藏的细胞培养小技巧:

1. 买细胞要去靠谱的地方买,比如 ATCC 或者青旗生物。一般上面会有针对细胞的介绍,这样培养之前可以了解细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。

2. 不管是买的细胞,还是别人惠赠的细胞,刚拿到手赶紧的做两件事:检测是否有支原体污染;迅速扩增冻存,冻存细胞复苏后第二天*更换一次培养基。

3. 发现细胞有污染迅速处理掉,特别是当你养了很多种细胞时。细菌污染、真菌污染很容易发现,支原体污染的话,细胞会长的慢,可以买个支原体检测的试剂盒定期检测一下。

4. 不同细胞生长周期不同。有的生长很快,比如说 MDA-MB-231,传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了。有的又是特别慢,比如 BT474,传代是一分二,复苏起始的时候两周多才能长满。这就需要要在培养细胞的过程中多多摸索。

5. 对于娇弱的细胞,就得细心呵护。胰酶消化不能过久,吹得时候要轻柔,离心时候也要注意转速和时间。每天都要去看一下细胞,肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。记住,是每天。

 

 

细胞培养常见问题及解决方法

问题

原因

解决方案

细胞生长缓慢

生长培养基使用不当

按照生产商的建议,使用相应的预热生长培养基。

生长培养基中血清质量差

使用其他批次血清。

传代操作不当

按照生产商的建议消化时间及传代比例进行操作。

换液过于频繁

降低换液频率,参考生产商推荐的换液频率。

细胞传代次数过多

使用传代次数较少的健康细胞。

细胞生长超过汇合状态

哺乳动物细胞传代应在细胞处于对数期、未达到汇合状态时进行,建议细胞密度达 80-90%传代。

细胞被支原体污染

将细胞、培养基和试剂丢弃;新取一只冻存细胞,并且使用新的培养基和试剂。

细胞复苏存活率低

细胞冻存不当

新取一只冻存细胞,并储存在液氮中。将细胞储存在液氮中,直至复苏。

自行制备的冻存细胞无活性

将细胞按照生产商推荐的密度冻存。

制备冻存细胞时使用传代次数少的细胞。

严格按照生产商推荐的操作程序冻存细胞。请注意本手册推荐的冷冻程序是冻存细胞的一般流程,只能作为指导原则使用。

新取一只冻存细胞。

细胞复苏方法不当

严格按照生产商推荐的操作程序复苏细胞。请注意本手册推荐的解冻程序是复苏细胞的一般流程,只能作为指导原则使用。

确保冷冻细胞解冻迅速,接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。

复苏培养基使用不当

使用生产商推荐的培养基。确保培养基使用前已经预热。

细胞稀释过度

按照生产商的建议,将解冻后的细胞高密度接种,以改善复苏效果。

处理细胞时动作不够轻柔

冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影 响。不要通过涡旋振荡或者用力敲打培养瓶的方法使细胞脱落(培养昆虫细胞时除外),也不要高速离心细胞。

冻存液中所用保护剂在储存过程中未避光

如果未避光储存,冻存保护剂会转变为对细胞有毒性的物质;新取一只冻存保护剂,重新冻存细胞。

 

 ★由于细胞库现有细胞类目多,为了不出现混乱错误,需要了解相关细胞价格及详细资料直接call,对您造成的不便还请见谅!
 ★注:如运输过程中导致细胞污染或者死亡,我们将无条件补发
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最后,通过低温保藏储备一些细胞,以防支原体大面积来袭。如果支原体有抬头的迹象,或常规检测呈阳性结果,那么较可靠的补救措施是扔掉所有培养物,清洁培养箱和超净台,一切从头开始。当然,你得确保储备的细胞是不含支原体的。

 

 



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