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MDA-MB-231人乳腺癌细胞|MDA-MB-231细胞

MDA-MB-231人乳腺癌细胞|MDA-MB-231细胞

简要描述:青旗生物供应MDA-MB-231人乳腺癌细胞|MDA-MB-231细胞 ,细胞状态良好・*,保证活性・青旗生物有完的细胞库管理体系・出售人内皮细细胞、人呼吸系统细胞、人生生殖系统细胞、人泌尿系统细胞株、人消化系统细胞株、人血液系统细胞株、人神轻系统细胞株、动物细胞株、动物正常细胞株等,欢迎老师客御购买
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更新时间:2022-07-19

厂商性质:生产厂家

访问次数:401

详细说明:

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细胞名称MDA-MB-231人乳腺癌细胞|MDA-MB-231细胞

细胞培养,大致的步骤是这样:

1.胚胎或者一些刚出生的人的器官或者组织上取得细胞,配制成细胞悬浮液.把细胞液放到培养瓶中,在培养箱里培养--------原代培养.

但是,不要以为这样就能一直无限培养下去.

因为MDA-MB-231人乳腺癌细胞 在那个瓶壁上生长的时候,如果大量增殖,细胞之间会彼此相碰,细胞细胞就会停止分裂增殖,出现一种接触抑制.

2.我们为了它们能继续增殖,就用胰蛋白酶再把它们分开,然后再配制成细胞悬浮液,分开装到好几个瓶子里继续培养--------传代培养.


细胞传代
1.当细胞融合度达到90%以上时,给细胞传代;
2.37°C水浴预热培养基(DMEM+10% FBS);
3.在超净台中,弃培养基,加入2-5mlPBS清洗细胞后,再加入1ml胰酶消化细胞;
4.显微镜下观察到细胞变圆,有细胞开始脱离瓶壁时,加入5ml培养基(DMEM+10% FBS)终止消化;
5.用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞,并轻轻吹打将细胞吹散;
6.将细胞移入离心管中,1000rpm离心5min;
7.弃上清,加入15-20ml的培养基(含血清)重悬细胞后转入T75培养瓶中或按适当比例传到T25瓶中(确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间),细胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶),混匀细胞悬液,确保细胞均匀分布;
8.将培养瓶置于37°C,5% CO2的无菌培养箱中培养。

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1、细胞状态好,形态佳,易成活,是市面上比较好养的细胞之一;

2、物流迅速,复苏好后发货,次日就能到;

3、使用我司推荐的进口品牌血清进行培养实验,效果更佳。

 

 

专业技术人员李工收藏的细胞培养小技巧:

1. 买细胞要去靠谱的地方买,比如 ATCC 或者青旗生物。一般上面会有针对细胞的介绍,这样培养之前可以了解细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。

2. 不管是买的细胞,还是别人惠赠的细胞,刚拿到手赶紧的做两件事:检测是否有支原体污染;迅速扩增冻存,冻存细胞复苏后第二天*更换一次培养基。

3. 发现细胞有污染迅速处理掉,特别是当你养了很多种细胞时。细菌污染、真菌污染很容易发现,支原体污染的话,细胞会长的慢,可以买个支原体检测的试剂盒定期检测一下。

4. 不同细胞生长周期不同。有的生长很快,比如说 MDA-MB-231,传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了。有的又是特别慢,比如 BT474,传代是一分二,复苏起始的时候两周多才能长满。这就需要要在培养细胞的过程中多多摸索。

5. 对于娇弱的细胞,就得细心呵护。胰酶消化不能过久,吹得时候要轻柔,离心时候也要注意转速和时间。每天都要去看一下细胞,肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。记住,是每天。

 

MDA-MB-231人乳腺癌细胞|MDA-MB-231细胞培养的污染类型及处理
污染是细胞培养的大敌。预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。一开始就要十分重视,应积极采取措施,防止污染,否则会前功尽弃,不仅浪费时间,而且浪费人力、物力,甚至造成无法弥补的损失。

细菌污染

可能原因

建议解决方法

细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染,即使在细胞培养液中加入了抗菌素(一般为预防剂量),也可能因为操作不慎而引起污染。zui常见的有革兰氏阳性菌,如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌,其中又以白色葡萄球菌较常见。

培养细胞受细菌污染后,会出现培养液变混浊,pH改变。也有的培养液肉眼观察无多少改变,只能在镜下发现菌体才知污染。所以,每天应仔细观察。污染后细胞发生病理改变,胞内颗粒增多、增粗,zui后变圆脱落死亡,造成试验失败和细胞株(系)丢失。

 

真菌污染

可能原因

建议解决方法

 真菌污染是细胞培养过程中zui常见的一种,尤其在霉雨季节进行细胞培养更易污染。zui常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。

 

培养细胞受细菌污染后,会出现培养液变混浊,pH改变。

MCF7 人乳腺癌细胞也有的培养液肉眼观察无多少改变,只能在镜下发现菌体才知污染。所以,每天应仔细观察。污染后细胞发生病理改变,胞内颗粒增多、增粗,zui后变圆脱落死亡,造成试验失败和细胞株(系)丢失。

五、非同种细胞污染
由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开,操作不当,往往会使一种细胞被另一种细胞污染。如“灵长类”细胞系发现猴和鼠类细胞的混合物,ERK/KD细胞是从兔肾中分离出来的,而现在句却认为是HeLa细胞。目前,世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染,致使许多实验宣告无效。
非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生,大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致

 

细胞培养常见问题及解决方法

问题

原因

解决方案

细胞生长缓慢

生长培养基使用不当

按照生产商的建议,使用相应的预热生长培养基。

生长培养基中血清质量差

使用其他批次血清。

传代操作不当

按照生产商的建议消化时间及传代比例进行操作。

换液过于频繁

降低换液频率,参考生产商推荐的换液频率。

细胞传代次数过多

使用传代次数较少的健康细胞。

细胞生长超过汇合状态

哺乳动物细胞传代应在细胞处于对数期、未达到汇合状态时进行,建议细胞密度达 80-90%传代。

细胞被支原体污染

将细胞、培养基和试剂丢弃;新取一只冻存细胞,并且使用新的培养基和试剂。

细胞复苏存活率低

细胞冻存不当

新取一只冻存细胞,并储存在液氮中。将细胞储存在液氮中,直至复苏。

自行制备的冻存细胞无活性

将细胞按照生产商推荐的密度冻存。

制备冻存细胞时使用传代次数少的细胞。

严格按照生产商推荐的操作程序冻存细胞。请注意本手册推荐的冷冻程序是冻存细胞的一般流程,只能作为指导原则使用。

新取一只冻存细胞。

细胞复苏方法不当

严格按照生产商推荐的操作程序复苏细胞。请注意本手册推荐的解冻程序是复苏细胞的一般流程,只能作为指导原则使用。

确保冷冻细胞解冻迅速,接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。

复苏培养基使用不当

使用生产商推荐的培养基。确保培养基使用前已经预热。

细胞稀释过度

按照生产商的建议,将解冻后的细胞高密度接种,以改善复苏效果。

处理细胞时动作不够轻柔

冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影 响。不要通过涡旋振荡或者用力敲打培养瓶的方法使细胞脱落(培养昆虫细胞时除外),也不要高速离心细胞。

冻存液中所用保护剂在储存过程中未避光

如果未避光储存,冻存保护剂会转变为对细胞有毒性的物质;新取一只冻存保护剂,重新冻存细胞。

 

 ★由于细胞库现有细胞类目多,为了不出现混乱错误,需要了解相关细胞价格及详细资料直接call,对您造成的不便还请见谅!
 ★注:如运输过程中导致细胞污染或者死亡,我们将无条件补发
       收货后十个工作日内有其他问题提供照片可半价重发
最后,通过低温保藏储备一些细胞,以防支原体大面积来袭。如果支原体有抬头的迹象,或常规检测呈阳性结果,那么较可靠的补救措施是扔掉所有培养物,清洁培养箱和超净台,一切从头开始。当然,你得确保储备的细胞是不含支原体的。

 



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