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HEp-2人喉表皮样癌细胞|HEp-2细胞

HEp-2人喉表皮样癌细胞|HEp-2细胞

简要描述:细胞名称HEp-2人喉表皮样癌细胞|HEp-2细胞
生长特性 贴壁生长
形态特性 上皮样
产品规格 1×10^6 cells/瓶
培养条件 MEM+10%FBS+1%P/S
生长条件 气相:5%CO2  95% 空气   温度:37 ℃
冻存条件 90%FBS+10%DMSO
背景资料 初认为这个细胞源自喉上皮癌,但随后通过同功酶分析、HeLa标

更新时间:2022-07-19

厂商性质:生产厂家

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详细说明:

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细胞名称 HEp-2人喉表皮样癌细胞|HEp-2细胞

生长特性 贴壁生长

形态特性 上皮样

产品规格 1×10^6 cells/瓶

培养条件 MEM+10%FBS+1%P/S

生长条件 气相:5%CO2  95% 空气   温度:37 ℃

冻存条件 90%FBS+10%DMSO

背景资料 最初认为这个细胞源自喉上皮癌,但随后通过同功酶分析、HeLa标记染色体和DNA指纹分析发现,起源细胞已被HeLa污染。 角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。

HEp-2人喉表皮样癌细胞|HEp-2细胞常规说明:

冻存液成分:10%DMSO+40%FBS+50%基础培养液

细胞质检情况:不含细菌、真菌、支原体等微生物污染

传代建议:1:2~1:3传代,2~3天换液1次

特别提醒:签收细胞后,如细胞状态不佳,或培养中遇到问题,烦请当天尽快联系,以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据,请务必重视。

一、 HEP-2(HEP2);人喉表皮样癌细胞复苏

1. 把冻存管从液氮中取出来,立即投入37℃水浴锅中,轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。

3. 把上清液倒掉,加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动,使培养皿中的细胞均匀分布。

4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等,放到CO2培养箱中培养,细胞贴壁后换培养基。

5. 3天换一次培养基。

二、 HEP-2(HEP2);人喉表皮样癌细胞传代

1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。

2. 把原有培养基吸掉。

3. 加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行),消化1-2分钟。

4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。

5. 用移液枪吹打细胞,把细胞都悬浮起来。

6. 把细胞吸到15ml的离心管中,1000转离心5分钟。

7. 倒掉上清液,加1-2ml培养基,把细胞都吹起来。

8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般,癌细胞分5个,正常细胞传3个。继续培养。

三、 HEP-2(HEP2);人喉表皮样癌细胞冻存

把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来,分装到灭菌的冻存管中,静止几分钟,写明细胞种类,冻存日期。4℃ 30min,-20℃ 30min,-80℃过夜,然后放到液氮灌中保存。

冻存液的配制: 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加,边滴边摇。

要注意的就是无菌操作!

细胞培养常见问题及解决方法

问题

原因

解决方案

细胞生长缓慢

生长培养基使用不当

按照生产商的建议,使用相应的预热生长培养基。

生长培养基中血清质量差

使用其他批次血清。

传代操作不当

按照生产商的建议消化时间及传代比例进行操作。

换液过于频繁

降低换液频率,参考生产商推荐的换液频率。

细胞传代次数过多

使用传代次数较少的健康细胞。

细胞生长超过汇合状态

哺乳动物细胞传代应在细胞处于对数期、未达到汇合状态时进行,建议细胞密度达 80-90%传代。

细胞被支原体污染

将细胞、培养基和试剂丢弃;新取一只冻存细胞,并且使用新的培养基和试剂。

细胞复苏存活率低

细胞冻存不当

新取一只冻存细胞,并储存在液氮中。将细胞储存在液氮中,直至复苏。

自行制备的冻存细胞无活性

将细胞按照生产商推荐的密度冻存。

制备冻存细胞时使用传代次数少的细胞。

严格按照生产商推荐的操作程序冻存细胞。请注意本手册推荐的冷冻程序是冻存细胞的一般流程,只能作为指导原则使用。

新取一只冻存细胞。

细胞复苏方法不当

严格按照生产商推荐的操作程序复苏细胞。请注意本手册推荐的解冻程序是复苏细胞的一般流程,只能作为指导原则使用。

确保冷冻细胞解冻迅速,接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。

复苏培养基使用不当

使用生产商推荐的培养基。确保培养基使用前已经预热。

细胞稀释过度

按照生产商的建议,将解冻后的细胞高密度接种,以改善复苏效果。

处理细胞时动作不够轻柔

冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影 响。不要通过涡旋振荡或者用力敲打培养瓶的方法使细胞脱落(培养昆虫细胞时除外),也不要高速离心细胞。

冻存液中所用保护剂在储存过程中未避光

如果未避光储存,冻存保护剂会转变为对细胞有毒性的物质;新取一只冻存保护剂,重新冻存细胞。

 

 ★由于细胞库现有细胞类目多,为了不出现混乱错误,需要了解相关细胞价格及详细资料直接call,对您造成的不便还请见谅!
 ★注:如运输过程中导致细胞污染或者死亡,我们将无条件补发
       收货后十个工作日内有其他问题提供照片可半价重发
最后,通过低温保藏储备一些细胞,以防支原体大面积来袭。如果支原体有抬头的迹象,或常规检测呈阳性结果,那么较可靠的补救措施是扔掉所有培养物,清洁培养箱和超净台,一切从头开始。当然,你得确保储备的细胞是不含支原体的。

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