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大鼠骨髓瘤细胞|大鼠的动物细胞

大鼠骨髓瘤细胞|大鼠的动物细胞

简要描述:产品名称:大鼠骨髓瘤细胞|大鼠的动物细胞
中国大鼠动物细胞,复苏及冻存细胞,国外及国产细胞,我们提供安全运输,低价、*、省心价供应,公司已打造国内细胞航母的技术服务,公司给广大客户培养细胞,成功率很高。

更新时间:2022-07-19

厂商性质:生产厂家

访问次数:425

详细说明:

产品名称:大鼠骨髓瘤细胞|大鼠的动物细胞

  • 细胞数量: 1*10^6
  • 细胞种属: 大鼠源
  • 生长特性: 贴壁
  • 培养基: DMEM-H
  • 形态特征: 成纤维细胞样
  • 传代方法: 1:3传代,2-3天传一代
  • 培养条件: 胎牛血清至最终浓度为10%。环境:空气,95%;二氧化碳(CO2),5%;温度,37℃
  • 细胞描述: 亲本L的亚克隆,是最早建立的连续传代细胞之一,L细胞源自100天的雄性C3H/An小鼠的皮下网眼状空隙和脂肪组织。APRT+,HPRT+。
  • 细胞冻存: 液氮冻存(冻存液基础培养基+20%FBS+10%DMSO)
  • 细胞运输: 干冰运输(2ml冻存管)或活细胞运输(T25瓶)

 

大鼠骨髓瘤细胞|大鼠的动物细胞

形态特性 上皮细胞样  
生长特性 贴壁生长 
特征特性 CHO-HCV-C细胞整合有丙型肝炎病毒的Core基因,能稳定表达C蛋白,是HCV基础研究的*摸型。它由武汉大学病毒学国家重点实验室郭佳博士于2008年构建并保存。 

注意事项

冻存细胞接收后的处理:

1.干冰运输,收到细胞后立即转入-80℃冰箱短暂中转或直接复苏;
2.收到细胞后,若发现干冰已经*挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。

复苏细胞接收后的处理:

1.收到细胞后,请首先检查培养瓶是否破损或漏液,培养液是否混浊,如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。
2.75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后,在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片,若有贴壁细胞脱落,可收集上清离心,将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。
3.建议收到当天不要消化处理,如果细胞长满90%,可选择传代处理。
4.如您收到细胞3天内没有反馈相关问题,出现的细胞问题将不提供免费重发服务。

细胞培养方法:

  1. 细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
    ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
    ②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
    ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
    ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
    ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
    ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
    2、细胞复苏:
    ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
    ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
    3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
    ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
    ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;
    ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
    ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

4.购买之细胞冷冻管经解冻后,为何会发生细胞数目太少之情形?
    答:研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少,大都是因为离心过程操作上的失误,造成细胞的物理性损伤,以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心,应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。但对于DMSO敏感的细胞,还是复苏细胞时,用离心去除DMSO比较好。
5.购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因?
    答:研究人员在细胞培养时出现存活率不佳,原因比较复杂,常见原因可归纳为:培养基使用错误或培养基品质不佳;血清使用错误或血清的品质不佳;解冻过程错误;冷冻细胞解冻后,加以洗涤细胞和离心;悬浮细胞误认为死细胞;培养温度使用错误;细胞置于–80 ℃太久等。建议严格参照ATCC或ECACC的标准操作规程进行细胞复苏、冻存等工作。
6.支原体污染会对细胞培养有何影响?
    答:支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数、代谢及研究之任一数据。故进行实验前,必须确认细胞为mycoplasma-free,实验结果之数据方有意义。
7.冷冻保存细胞之方法?
    答:冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃(30-60 分钟)→-20℃( 30 分钟) → -80℃(16-18 小时或隔夜)→ 液氮罐长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80 ℃以下, 再放入液氮中长期储存。注意:-20℃不可超过1 小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
 
8.悬浮细胞应如何继代处理?
    答:一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养瓶中,稀释细胞浓度即可。若培养液太多时可分瓶取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养瓶中,加入新鲜培养基稀释至适当浓度,重复前述步骤即可。
9.欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速?
    答:欲回收动物细胞,其离心速率一般为300×g (约1,000rpm),5 - 10 分钟,过高之转速过长时间都将造成细胞死亡。合适的离心转速是根据相对离心决定。 RCF=1.119×105×r×(rpm)2,其中 r为离心机转轴中心与离心套管底部内壁的距离;rpm为离心机每分钟的转数;RCF(relative eentrifugal force)为相对离心力,以重力加速度g(980.66cm/s2)的倍数来表示表示单位。

NR8383大鼠肺泡巨噬细胞系

 

"细胞培养三不要:

养科研细胞是生物医学研究的基本功。有三个小经验可以和大家分享一下:

1. 不要烧瓶口。大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子,觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑?知道为什么吗?烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸/碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候,炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后,空气变冷,压力骤降,培养基中的碳酸就会转化成二氧化碳,释放出来。培养基中的碳酸少了,当然会变碱。如果不烧瓶口的话,你会发现培养液变碱的速度会大大减慢。(当然多多少少还是会有一点越用越碱,因为室温还是比冰箱内的温度高)

其实烧瓶口防止污染纯粹是心理安慰。不妨试一下把手指在火上晃几下,你会发现根本就不会烧疼。如果有细菌的话,这么晃两下也烧不死多少。要想烧死全部细菌,除非把瓶口和塞子烧红。我在国内从来就不烧瓶口。来美国以后发现这里更*,超净台内根本就不点酒精灯。

2. 不要频繁看细胞。对于初学者而言,养细胞就像养孩子一样,有空就要去看看。细胞越是养不好,就越是经常去看。实际上看细胞对细胞的生长没有任何好处,特别是对原代细胞或是免疫磁珠分选后,密度特别低的细胞。培养基中的生长因子是非常有限的。细胞好不容易自分泌一点儿促生长的因子在其周围,形成有利于生长的局部环境。你跑去看细胞,培养瓶这么一晃,把因子都给晃散了。经常可以看到新手一天到晚都在看细胞,细胞老是长不好。老手细胞一扔好几天不管,细胞疯长。

3. 不要怕消化。

大鼠细胞系在传代的时候,初学者往往生怕细胞消化过度,早早地终止消化。细胞没下来就使劲吹灯,吹得满瓶子都是气泡。在我看来,用力吹打对细胞的损伤比消化更大。我师兄在做血管平滑肌原代的时候,37度消化过夜,细胞也没事。我一般是等细胞*变圆后才中止消化。细胞轻轻一晃就能下来。还有,动作要轻柔,尽量不要产生气泡。气泡在破裂时的应力相当大,对细胞的伤害也是很大的。" 详见细胞说明书

传代方法: 建议1:2-1:3 两天换液一次

冻存条件: 详见细胞说明书

主要文献: 请具体查阅相关发表文章

细胞培养实验常见问题总结:
1.一般客户拿到细胞后,应该注意什么?客户收到细胞后先不开盖,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各一张),排除细胞本身污染的情况;收到细胞未开封,出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,将培养瓶中培养液吸出,留下10ml培养液继续培养;超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制,慎用Hanks液配制。
2.快递细胞多久能到,是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞?
我们采用快递发货,一般外地2--3天,寄细胞前请确认当地温度,如果气温低于4度的,则采用邮寄冻存细胞。
3.可否使用与原先培养条件不同之培养基?不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活。
4.可否使用与原先培养条件不同之血清种类?不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。 
5.培养基中血清的比例多少合适?血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的含量多少会对细胞的生长会产生极大的影响。血清的含量一般为5%-15%,不要低于5%或高过20%,因为含量过低会导致细胞营养不足,过高则会破坏渗透压平衡。一般建议血清含量为10%,可以适量加减。
6. 何时须更换培养基?视细胞生长密度而定,或遵照细胞株基本数据上的更换时间,按时更换培养基即可。还可以参照指示剂的颜色变化进行更换。
7.大鼠细胞系购买的复苏细胞,为何会有脱落?因为运输的过程中不可避免的会有震荡,收到后可以离心收集。
8.购买的细胞冷冻管经解冻后,为何会发生细胞数目太少之情形?研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少,大都是因为离心过程操作上的失误,造成细胞的物理性损伤,以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心,应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。

 

 



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