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SUNE-1细胞|SUNE-1人鼻咽低分化鳞癌株细胞

SUNE-1细胞|SUNE-1人鼻咽低分化鳞癌株细胞

简要描述:青旗生物*的SUNE-1细胞,SUNE-1细胞|SUNE-1人鼻咽低分化鳞癌株细胞
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更新时间:2022-07-19

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详细说明:

SUNE-1细胞|SUNE-1人鼻咽低分化鳞癌株细胞
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SUNE-1细胞SUNE-1细胞供应

细胞培养方法:

  1. 细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
    ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
    ②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
    ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
    ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
    ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
    ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
    2、细胞复苏:
    ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
    ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
    3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
    ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
    ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;
    ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
    ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

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生长特性:

贴壁生长

培养条件

培养基: DMEM+10%FBS(建议SERANA胎牛血清S-FBS-EU-015或GIBCO 16000-044胎牛血清)

气相:空气95%,二氧化碳5%

温度:37℃

培养:

一、贴壁细胞

1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行2-3小时的缓冲,.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代;

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%,需要对其进行传代,*次传代比例为1:2。

3传代步骤:将0.25%含EDTA胰酶置于37°预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入1mlPBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1ml预热好的胰酶,置于37°孵育消化(*次消化需时常取出置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为*消化时间,记录*消化时间,以便于下次消化),消化好后加入1ml*培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之*脱落,然后收集细胞悬液,1200rpm离心3min,弃上清,加入*培养基重悬细胞,进行传代。

 

二、悬浮细胞

1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒,然后置于无菌操作台,打开瓶口,轻轻吹打后,将其中的细胞悬液转移到离心管中,然后1200rpm离心3min,去上清;

2.将离心好的细胞转移至T-25瓶中,并加入5-6mL新鲜培养基,然后将其置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液(离心后去旧液,加入新鲜培养基);

3.显微镜观察细胞数目比较多时,对其进行传代,*次传代比例为1:2(离心后平均分成两瓶培养)。

 

 

 



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