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Gibco胎牛血清可以使用低温凝固点的方法检测渗透压

发布时间:2017-05-02 点击量:535
Gibco胎牛血清通常作为补充成分添加在基础培养基内使用。它能够提供各种大分子蛋白,小分子量营养,水溶性成分的转运蛋白,和其它一些细胞在体外所必需的成分,如激素和附着因子。血清可以结合或中和一些生长因子中的有毒成分,并提供培养基的缓冲能力。细胞培养时血清的添加依赖于基础培养基的化学组成,培养细胞的类型,及所用的培养系统。
我们在提供细胞培养基、平衡盐溶液、无血清培养基和试剂的同时,还提供高品质的血清。我们对血清制备进行全过程监管。从血清收集到zui终产品检验和内部稽核的每一个步骤,我们都采用设备和标准操作程序,以确保整个过程中每个环节的产品质量。对整个过程的控制可以保证产品的持续高品质,降低不同批次的差异。
Gibco胎牛血清处理:全部血清:收集的血液均在冷藏条件下处理。血清和血分离后立即将血清合并并冷冻。只有符合我们的检测标准的血清才被接受作进一步处理。
热灭活血清:热灭活是在56℃水浴中严格控温30分钟。透析血清:用10,000截留分子量的透析膜在0.15M的NaCl中进行透析,直到葡萄糖水平低于5mg/dl(用邻甲苯胺测试法检验)。γ射线照射血清:可按客户要求对血清进行γ射线照射。通过γ射线照射以灭活各种动物血清(包括胎牛血清、新生牛血清、猪血清和马血清)中的病毒和支原体的方法已经得到证实。研究证实照射剂量在30-45kGy为宜。血清在此照射后物理化学特性和细胞培养表现没有变化。装瓶:粗血清须通过一系列的过滤才成为成品。zui后的过滤步骤包括使用0.2um和0.1um的无菌过滤。胎牛血清须通过三次0.1um过滤,其他血清须通过0.2um过滤。zui终产品的质量控制:我们采取以下方法对每一批次的产品选取一定数量的样品进行质量控制分析:
Gibco胎牛血清化学检测:使用低温凝固点的方法检测渗透压,以保证符合产品规范。我们每天使用国家标准的技术研究所标定的标准溶液对我们的渗透压检测仪器进行校准。同样每天使用国家标准技术研究所标定的标准溶液对pH计进行校准。
使用电泳图谱鉴定血清的整体性质。样品被转移到硝酸纤维素基质中,并在缓冲体系内迁移。条带经染色、清洁、干燥后用密度仪进行扫描,以检测白蛋白和球蛋白组分的相对浓度。为证实是否在适当的条件下进行采血和处理,使用修饰的Fleming方法对血红蛋白进行分光光度检测。
随着动物年龄的增加,血清总蛋白含量也相应地提高。使用自动化的Biuret方法进行总血清蛋白的检测,以确认动物年龄并验证符合产品规范。使用色度计在不同波长下检测样品和Biuret试剂混合波的吸光度。自动计算结果后,与标准曲线比较,即可得到蛋白值(克/公升)。
稳定性检测程序:在每一个标记为体外诊断的产品上显示的效期表明了这个产品具有多长时间的效能。我们的稳定性程序确定和证明了产品效期。我们定期监测批量产品,确定产品在推荐贮存条件下具有可接受效果的时间长度。
Gibco胎牛血清微生物学检测:所有血清使用Barile&Kern的大体积方法检测支原体。在推荐方法的检测范围内检测结果是准确的。样品至少应该在肉汤中合并培养3个星期,同时要在琼脂平板上进行不少于4次传代培养。在有氧和厌氧(95%氮,5%CO2)条件下,平板在36±2℃下孵育。在检测过程中,每周对琼脂平板进行一次微生物生长情况检验。使用Dienes染色法对怀疑被污染的琼脂平板进行支原体菌落的检测。然后,对平板进行再次镜检。对孵育肉汤瓶要定期进行浊度和pH值变动的检测。在推荐方法检测范围内,所有血清也要使用Hoechst荧光DNA染色法进行不可在肉汤中培养的支原体(包括M.hyorhinis属)检测。
病毒检测:已知无外来物质的细胞培养基须经过在包含15%测试血清的生长培养基中进行为期21天的三次传代培养。使用对照培养基和已知对外来物质为阴性的血清平行地维持阴性对照培养。整个期间,检测所有的培养情况,以便发现是否存在病毒诱发的细胞形态改变或致细胞病变效应。在14至21天的培养期间,对含有检测血清的平行培养瓶按下面标准病毒检测方法进行评估。
Gibco胎牛血清将其中一瓶检测细胞用胰蛋白酶消化,然后把细胞分别加入到总面积为6cm 2 的六室载玻片上。同时准备阴性对照载玻片。在检测培养的单室载玻片上加入牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛细小病毒、牛腺病毒、狂犬病毒和呼肠病毒的染色剂,作为单个的阳性对照。再经过7天培养(总共21天),利用荧光抗体技术检测病毒。
通过对检测培养进行苏木精伊红染色,观察致细胞突变效应(CPE)或其他病毒诱导效应。检测细胞是否存在CPE效应、内含物、多核体或其他异常效应。
内毒素检测:我们用阿米巴变形细胞溶解物(LAL)凝胶法来检测胎牛血清的内毒素含量。
效能检测:
对每一批次的胎牛血清,我们都进行下述培养效能检测。选择血清zui重要的标准是其支持特殊细胞的生长能力。因此,除了保证血清通过严格的品质控制,我们也同时在实验室条件下对血清的三个重要的培养效能进行检测:克隆效率、贴壁效果和二倍体成纤维细胞生长促进。