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影响Gibco胎牛血清品质的因素有哪些?

发布时间:2017-04-17 点击量:471
市场上的Gibco胎牛血清种类繁多,鱼龙混杂,很多科研工作者,特别是刚接触细胞培养的人,难以分辨血清质量的优劣。根据牛人十多年来Gibco胎牛血清生产销售的经验,总结如下:
一、Gibco胎牛血清外观
拿到血清,zui先接触的是血清外观,对于缺少细胞培养经验的人来说,外观的判断尤为重要。
1、Gibco胎牛血清颜色
根据血红蛋白含量的不同,胎牛血清可表现出黄色或红色,我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl,实际上,血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响,这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度,良好的操作能降低血清的溶血。
国产血清的采血点很分散,大多是由屠户采血后马上离心收集,所以很少会有溶血,表现出明亮的蜡黄色,当然,国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清。
进口胎牛血清或多或少总有点溶血,因为真正的胎牛血清凝血功能差,红细胞容易破裂。
总的来说,国产的血清呈现出蜡黄。进口的血清,质量的呈现出谈黄、微红色,如Gibco 16000,差点的呈现出橘红色或鲜红色。当然,热灭活血清或保存不当的血清,由于血红蛋白的破坏氧化,会呈现出暗红,甚至咖-啡色。
2、Gibco胎牛血清沉淀
很多血清客户,会发现进口血清有沉淀,从而怀疑血清的质量问题,这是没有根据的。
血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生,对血清质量没有任何影响,沉淀的产生原因很多,和厂家的加工生产方式密切相关。
国产的血清,大多来自北方,由于价格低廉,保存环境都不好,从采血、冷冻、运输到生产会经过多次冻融,每次冻融过程,就会析出部分纤维蛋白沉淀,这样,血清成品过滤后看起来反而更加的“干净”,很少有沉淀产生。
进口的胎牛血清,过滤分装前很少会反复冻融,生产后的成品也是清澈的,但随着时间的推移,血清中的大量纤维蛋白会析出形成沉淀。当然,进口的新生牛血清,一般牛龄都在2周左右,血清中的各种蛋白含量明显偏高,生产后血清可能会浑浊,甚至有大量沉淀。
当然,购买回来的血清都是冰冻状态,使用时需要融化,融化过程在温度较低的状态下慢慢进行,否则沉淀相对较多,虽然沉淀并不直接影响血清的质量,但对细胞的显微观察有一定的阻碍。
3、Gibco胎牛血清澄清度
进口胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低,表现为稀薄、清淡,而国产血清,因为绝大多数是新生牛血清,相对而言更加粘稠,颜色略深,这对于初步接触血清的人很难判断,但把两者进行对比,可容易分辨。
二、Gibco胎牛血清主要技术指标
1、内毒素
根据《中国药典》、《美国药典》,血清内毒素含量≤10EU/ml。内毒素是细菌破裂后的细胞壁的成分,因此内毒素含量的高低可表现出采血到生产一系列过程中的无菌操作情况。目前市场上Gibco的澳洲、新西兰胎牛血清内毒素≤10EU/ml;HyClone的澳洲胎牛血清内毒素≤5EU/ml,而南美胎牛血清内毒素<25EU/ml,血清质量也未见影响,可见内毒素含量偏高不影响血清质量,除非含量*,预示着已经污染。
2、血红蛋白含量
胎牛血清的颜色会根据血红蛋白含量的不同表现出黄色、淡黄色、橘红色、微红色等。细胞培养用血清的标准是血红蛋白含量不高于20mg/dl,颜色越红,数值越高;反之,数值越低。实际上,血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响。这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度,良好的操作能降低血清的溶血。
3、Gibco胎牛血清总蛋白含量
胎牛血清的总蛋白含量一般范围是35-50mg/ml,数值偏高,说明采血的牛龄偏大,不是胎牛;数值偏低,表明血清可能掺水了。
4、pH
根据药典,胎牛血清的pH值在7.0-8.5之间,并没有什么具体依据把进口血清和国产血清用7.5这个分界线界定。
5、渗透压
胎牛血清渗透压的检测一般采用冰点法,渗透压摩尔浓度(mOsmol/kg):250-330之间
6、微生物
包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体等。随着各个品牌血清生产条件的改善提高,细菌、霉菌等“大型”微生物几乎能100%控制。支原体通过0.1um3次无菌过滤去除。关于噬菌体主要是生产环境过程中带入,又无法过滤,很难彻底清除,但对血清质量影响不大,不过对于工业生产的客户来说,往往会采用γ照射的胎牛血清来避免噬菌体。
7、Gibco胎牛血清免疫球蛋白
免疫球蛋白的数值能完全体现出采血时的牛龄情况,新生牛血清容易产生IgM,IgG的含量也偏高;胎牛血清不含IgM,IgG的含量也较低。可以通过血清蛋白电泳SDS检测。
低IgG的胎牛血清推荐适用于抗体生产及相关领域。 

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