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RNA提取试剂该如何操作呢?下面一起来看看吧

发布时间:2022-11-26 点击量:151
  RNA提取试剂是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂,可以提取细菌、植物、动物组织和细胞以及新鲜血液的总RNA。
 
  那么接下来让我们来了解一下RNA提取试剂的操作步骤吧
 
  1.样品处理:a.植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
 
  b.动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
 
  c.贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,每106细胞加1ml裂解液。用取样器吹打混匀。
 
  d.细胞悬液:离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
 
  e.血液处理:取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液,混匀后室温放置10分钟,10000rpm离心1分钟。弃上清,若沉淀含有红细胞,可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1ml裂解液混匀。
 
  2.将处理后的样品在室温放置5分钟,使得核酸蛋白复合物分离。
 
  3.向匀浆样品中加0.2ml氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置3-5分钟。
 
  4.2-8℃12000rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中,把水相转移到新管中,不要吸到沉淀。
 
  5.吸附柱前处理:在吸附柱中加入500ul洗柱液,室温放置2分钟,2-8℃12,000rpm离心2min,弃废液。
 
  6.第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀,加入吸附柱静置2分钟,2-8℃12000rpm离心2min,弃废液。
 
  7.向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),2-8℃12,000rpm离心2min,弃废液。
 
  8.向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8℃12,000rpm离心2min,弃废液。
 
  9.12000rpm离心2min,弃掉收集管,将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。
 
  10.将吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ulRNasefreeddH2O,室温放置5min,12000rpm室温离心2min即得到RNA。
 
  注意事项:
 
  1、所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品,操作过程要小心,带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
 
  2、RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA不纯,需电泳检测。