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ELISA加样如何避免气泡?

发布时间:2022-03-24 点击量:674

通常气泡都是聚集在酶标板的孔周围,导致孔中液体不能与孔壁有效接触,使孔内反应不均一。很多说明书、教科书上也都提到,加样时要避免出现气泡,这到底是什么原因呢?因为在做实验的过程中,有时为了打干净枪头里面的液体,很容易产生气泡,是不是这样对实验结果会后什么影响?

1、包被时有气泡的话,将导致包被不*实际包被量下降--弱阳性甚至假阴性。

2、封闭时有气泡的话,将导致大量未结合位点的存在,引起非特异性结合--本底增高,假阳性。

3、加样时有气泡的话,抗原抗体不能有效的结合--弱阳性甚至假阴性。

4、加二抗时有气泡的话,抗原抗体不能有效的结合--弱阳性甚至假阴性(竞争法相反----假阳性)。

5、加显色液时有气泡的话---显色不*。

6、加终止液时有气泡的话(1、不能*终止反应 2、影响酶标仪比色,OD值增高)

7、洗涤时有气泡的话,非特异性结合物不能*洗去,做无用功。

避免方法:

1、加样时尽量靠近孔底(不要接触孔底),用力均匀,不要过快过猛。

2、封闭时一定要加满孔。

3、洗涤时一定要加满孔(重要),气泡会浮上来最终驱除。手工洗板时一定要吸干水分并用力拍干。