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做到这些,可减少小鼠ELISA试剂盒的实验误差

发布时间:2019-05-23 点击量:914
   做到这些,可减少小鼠ELISA试剂盒的实验误差
  小鼠ELISA试剂盒因为酶联免疫吸附技能现在在技能上缺乏标准化,虽然现在上以及我国有了部分标准血清或参比血清(血清盘)。因而,血标本在收集处理时应当心,在冰箱中保存不易过久。在酶联免疫测定尤其是直接试剂中,试剂的特异性取决于。标本凝聚不全时,血清中会残留部分纤维蛋白原,也易形成假阳性。检修标本中含有酶符号物的搅扰物,内源性搅扰物类风湿因子(RF)、黄疸等,类风湿因子是可作用于多种动物以及人IgGFc段的自身抗体,大都为IgM类,能充任抗原成分与固相及酶标抗体反响,然后出现非特异性显色。
  小鼠ELISA试剂盒的标本处理:
  1.本公司只对小鼠ELISA试剂盒本身负责,不对因使用试剂盒所造成的样本消耗负责,请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量,预留充足的样本。
  2.实验前应预测标本含量,如果标本浓度过高,应对标本进行稀释,使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。标本使用0.01mol/L的PBS稀释(PH=7.0-7.2)。
  3.若所检样本不包含在说明书所列样本之中,建议进行预实验验证其有效性,并注意留存样本。
  4.使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。
  5.若样本为细胞培养上清,因该类样本干扰因素较多,如:细胞状态、细胞数量、采样时间等,所以可能存在检测不出的情况。
  6.某些天然蛋白或重组蛋白,包括原核及真核重组蛋白,可能因为与试剂盒所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配,而不被检测出。
  7.建议使用新鲜样本,小鼠ELISA试剂盒保存时间过长可能会存在蛋白降解或变性导致实验结果偏差。
  技术人员为您总结出人实验缩小误差的6个要点:
  一:检验技
  应具备从事实验室操作的基本素质和实践经验。能熟练操作实验仪器、器械,具有一定总结和分析问题的能力,对实验中出现的意外情况能及时妥善解决。
  二:使用校对过的微量移液器,排除自然误差。移液器准确与否对定量检测尤为重要。
  三:仔细阅读说明书
  严格按照小鼠ELISA试剂盒说明书要求进行规范化操作。不同批号的试剂不可混用。值得改进的地方,反复试验确定成立后才能改进。
  四:洗涤*
  洗板不*,酶结合物本底显色会呈现假阳性。洗涤液要新鲜,现用现配,陈旧的洗涤液会出现本底增高现象,也可能出现假阳性。
  五:严控反应时间
  反应时间过长,酶失活;反应时间过短,酶结合物不能与血清中的微生物抗原抗体充分结合,生成物结构松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假阴性。
  六:注意小鼠ELISA试剂盒保存期,过保存期的试剂不能使用。