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Gibco胎牛血清白蛋白的提取

发布时间:2018-03-15 点击量:1135
   Gibco胎牛血清白蛋白的提取
  Gibco胎牛血清在细胞培养中作为基础生长培养基的添加剂。常用血清是Gibco胎牛血清。Gibco胎牛血清是从适合人类卫生习惯的农场收集的。有时,也可能用其他的牛血清,如新生牛血清或者供体牛血清。在细胞培养中,血清供应了丰富的高分子蛋白,低分子量营养物,疏水载体蛋白和其他体外细胞生长必要的成分如激素和粘附因子。同时,血清可以增加培养基的缓冲能力或中和有毒成分,起到保护细胞的作用。在细胞培养过程中是否选择添加血清,主要根据基础培养基化学成分,培养细胞的类型和培养体系而定。
  Gibco胎牛血清白蛋白(BSA),是胎牛血清中的一种球蛋白,一般提取胎牛血清白蛋白,经常使用的方法是加热法。在今天的技术咨询中,为您主要介绍方法步骤及所需材料。下面一起来看看是如何提取Gibco胎牛血清白蛋白的!
  一、所需材料
  Gibco胎牛血清取近郊屠宰场,以柠檬酸三钠为抗凝剂,血液采集后随即分离出血浆备用。需要的试剂有血清白蛋白;溴甲酚氯;醋酸纤维素薄膜,其余试剂均为分析纯。提取Gibco胎牛血清白蛋白需要准备LG-6型大容量冷冻离心机,电泳仪,紫外可见分光光度计,酸度计。
  二、具体方法
  白蛋白含量测定采用溴甲酚氯法,以胎牛血清白蛋白为标准.白蛋白纯度的测定采用醋酸纤维素薄膜电泳法。吸光度值的测定用分光光度计直接测定蛋白质溶液在波长为403nm处的光吸收值,然后折算成浓度为10g/L时牛血清白蛋白的光吸收值,用A403表示。
  Gibco胎牛血清白蛋白的生产工艺:新鲜抗凝牛血用LC-6型大容量离心机(3000r/min×30min)离心分离出血浆,加一定量的蒸馏水稀释,再加入适当的稳定剂和蛋白沉淀剂,然后按下述方法进行实验处理:
  1.不同pH值溶液对白蛋白的收率和质量的影响,在其它条件固定的情况下,试验不同pH值对白蛋白的收率、纯度及A403值的影响。
  2.不同加热保温时间对白蛋白的收率和质量的影响,在选定的pH值和其它条件固定的情况下,试验不同加热保温时间对Gibco胎牛血清白蛋白的收率、纯度及A403值的影响。
  3.不同稀释倍数对白蛋白的收率和质量的影响,在选定的pH值和保温时间及其它条件固定的情况下,试验不同稀释倍数对Gibco胎牛血清白蛋白的收率、纯度及A403值的影响。
  4.不同加热温度对白蛋白的收率和质量的影响,在其它条件选定的情况下,试验不同加热温度对Gibco胎牛血清白蛋白的收率、纯度及A403值的影响。