分享：小鼠肝细胞原代培养实验步骤

一、实验材料准备

1、动物：小鼠；

2、试剂：DMEM(含血清)、无血清DMEM培养基、胰酶、PBS；

3、器械：饭盒、纱布、小剪子、小镊子、大镊子、大烧杯、平皿、研磨玻片、滤网、离心管(15/50 ml)、6孔培养板、吸管、移液管、手套、微量加样器；

4、准备：酒精擦拭台面后把物品摆放好，开紫外线灯照30分钟后开鼓风机吹至实验结束；

二、方法

1、将小鼠断颈致死，置75%酒精泡2-3秒钟，取肝脏，置于盛有PBS的平皿中；

2、剔除脂肪、结缔组织、血液等杂物，转移到另一个盛有PBS液的平皿中；

3、用手术剪将脏器剪成小块(大小约1mm2)，玻片研磨，转到离心管，离心(1 000 rpm，5 min)；

4、视组织或细胞量加入5-6倍(3-5 ml)胰酶，37℃中消化20分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离；

5、加入3-5 ml含血清的培养液以中止胰酶消化作用；

6、用100目孔径滤网滤过，除去未消化的大组织块；

7、再次离心5 min，弃上清液；

8、加入无血清培养液5 ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液；

9、加入含血清的培养液1-2 ml(视细胞量)，血球计数板计数；

青旗生物温馨提示：

   小鼠肝细胞原代培养在细胞培养过程中，从实验室的设计到实验过程中的操作，都需要严格控制无菌。由于细胞对于生长的条件比较苛刻，所以小鼠肝细胞无论从实验室的设计，还是使用的物品及细胞培养的操作过程，都要注意保持无菌环境。

   上述文献仅供参考，不作为实验依据，具体详情需要自行实验数据理论为基准，上海青旗是一家集产品，技术，服务，售后等一站式的生物公司，为广大科研人员提供各类血清；动/人正常/人肿瘤细胞；ATCC标准菌株等。我们的宗旨是以：高品质、低价格、供货快、售后好为基准，为广大科研实验工作者提供的服务。