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分享:小鼠肝细胞原代培养实验步骤

发布时间:2017-10-27 点击量:4671

一、实验材料准备

1、动物:小鼠;

2、试剂:DMEM(含血清)、无血清DMEM培养基、胰酶、PBS;

3、器械:饭盒、纱布、小剪子、小镊子、大镊子、大烧杯、平皿、研磨玻片、滤网、离心管(15/50 ml)、6孔培养板、吸管、移液管、手套、微量加样器;

4、准备:酒精擦拭台面后把物品摆放好,开紫外线灯照30分钟后开鼓风机吹至实验结束;

二、方法

1、将小鼠断颈致死,置75%酒精泡2-3秒钟,取肝脏,置于盛有PBS的平皿中;

2、剔除脂肪、结缔组织、血液等杂物,转移到另一个盛有PBS液的平皿中;

3、用手术剪将脏器剪成小块(大小约1mm2),玻片研磨,转到离心管,离心(1 000 rpm,5 min);

4、视组织或细胞量加入5-6倍(3-5 ml)胰酶,37℃中消化20分钟,每隔5分钟振荡一次,或用吸管吹打一次,使细胞分离;

5、加入3-5 ml含血清的培养液以中止胰酶消化作用;

6、用100目孔径滤网滤过,除去未消化的大组织块;

7、再次离心5 min,弃上清液;

8、加入无血清培养液5 ml,冲散细胞,再离心一次,弃上清液;

9、加入含血清的培养液1-2 ml(视细胞量),血球计数板计数;

青旗生物温馨提示:

   小鼠肝细胞原代培养在细胞培养过程中,从实验室的设计到实验过程中的操作,都需要严格控制无菌。由于细胞对于生长的条件比较苛刻,所以小鼠肝细胞无论从实验室的设计,还是使用的物品及细胞培养的操作过程,都要注意保持无菌环境。

   上述文献仅供参考,不作为实验依据,具体详情需要自行实验数据理论为基准,上海青旗是一家集产品,技术,服务,售后等一站式的生物公司,为广大科研人员提供各类血清;动/人正常/人肿瘤细胞;ATCC标准菌株等。我们的宗旨是以:高品质、低价格、供货快、售后好为基准,为广大科研实验工作者提供的服务。